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¿Cómo escoger un plásmido?
Los elementos básicos de los que debe constar un plásmido son: un origen de replicación, el cual le proporciona autonomía propia e independiente del DNA nuclear, y un gen de resistencia a un antibiótico, que permite seleccionar a la bacteria transformada de las otras que no lo están.
¿Cómo elegir un vector de clonacion?
Una de las características que se utilizan para la selección del vector de clonación es el tamaño del inserto que se quiera clonar. Los plásmidos aceptan insertos de 15000 pb, el bacteriófago lambda 23000 pb, los cósmidos 45000 pb y los cromosomas artificiales más de 45000 pb.
¿Cómo elegir un vector de expresion?
Un vector de expresión debe tener los elementos necesarios para la expresión del gen. Estos pueden incluir un promotor, la secuencia correcta de iniciación de la traducción, como un sitio de unión ribosomal y un codón de inicio, un codón de terminación y una secuencia de terminación de la transcripción.
¿Cómo identificar y clonar un gen de interés?
Los pasos de la clonación de ADN Abrir el plásmido y «pegar» el gen dentro. Este proceso depende de enzimas de restricción (que cortan el ADN) y de ADN ligasa (que une el ADN). Insertar el plásmido en las bacterias. Se usa selección con antibióticos para identificar las bacterias que incorporaron el plásmido.
¿Cómo se realizaría la selección o screening de los clones con el ADN recombinante?
Los métodos para detectar y seleccionar son:
- Método de hibridación: se utiliza una sonda marcada que hibrida con el ADN recombinante o con el ARN mensajero que se transcribe a partir de él.
- Método inmunológico: se detecta la proteína codificada en el ADN recombinante mediante anticuerpos específicos.
¿Cómo se puede clonar un gen?
Los pasos básicos son:
- Abrir el plásmido y «pegar» el gen dentro. Este proceso depende de enzimas de restricción (que cortan el ADN) y de ADN ligasa (que une el ADN).
- Insertar el plásmido en las bacterias.
- Cultivar bacterias portadoras de plásmido en gran cantidad y usarlas como «fábricas» para producir la proteína.
¿Cuáles son las ventajas de los plásmidos?
La información genética contenida en dichos plásmidos no es esencial para la célula, sin embargo, pueden proporcionarle al hospedador ciertas ventajas para su supervivencia en un medio o ambiente determinado.
¿Cuáles son las características de los plásmidos?
Por ejemplo, los plásmidos encontrados en el grupo IncP-1 no solo han demostrado tener un amplio rango de huéspedes, sino también una alta frecuencia de transferencia.
¿Cuáles son los diferentes tipos de plásmidos de resistencia?
Los plásmidos de resistencia se dividen en dos grupos principales que incluyen: Grupo de rango de host estrecho : a menudo se replica dentro de una sola especie. Grupo de amplio rango de hospedadores : se transfiere fácilmente entre especies de bacterias.
¿Cuál es la diferencia entre un plásmido y un donante?
El plásmido F también contiene genes que participan en su propia transferencia. Por lo tanto, durante la conjugación, mejoran su propia transferencia de una célula a otra. Mientras que las células que procesan los plásmidos F se denominan donantes, las que carecen de este factor son los receptores.